1. Propósito: Este procedimiento tiene como objetivo proporcionar un procedimiento estandarizado para las operaciones asépticas y la protección de las habitaciones estériles.
2. Alcance de la aplicación: laboratorio de pruebas biológicas
3. Persona responsable: Tester Supervisor de CC
4.Definición: Ninguno
5. Precauciones de seguridad
Realizar estrictamente operaciones asépticas para prevenir la contaminación microbiana; Los operadores deben apagar la lámpara UV antes de ingresar al espacio estéril.
6. Proceduras
6.1. La habitación estéril debe equiparse con una sala de operaciones estéril y una sala de amortiguación. La limpieza de la sala de operación estéril debe alcanzar la clase 10000. La temperatura interior debe mantenerse a 20-24 ° C y la humedad debe mantenerse en 45-60%. La limpieza del banco limpio debería llegar a la Clase 100.
6.2. El espacio estéril debe mantenerse limpio, y está estrictamente prohibido acumular escombros para evitar la contaminación.
6.3. Evite estrictamente la contaminación de todos los equipos de esterilización y medios de cultivo. Los que están contaminados deben dejar de usarlos.
6.4. La habitación estéril debe equiparse con desinfectantes de concentración de trabajo, como una solución de cresol al 5%, al 70% de alcohol, una solución de calormetionina al 0,1%, etc.
6.5. La habitación estéril debe esterilizarse y limpiarse regularmente con un desinfectante apropiado para garantizar que la limpieza de la sala estéril cumpla con los requisitos.
6.6. Todos los instrumentos, instrumentos, platos y otros artículos que necesitan ser llevados a una habitación estéril deben estar bien envueltas y esterilizadas por los métodos apropiados.
6.7. Antes de ingresar a la habitación estéril, el personal debe lavarse las manos con jabón o desinfectante, y luego cambiarse en ropa de trabajo especial, zapatos, sombreros, máscaras y guantes en la sala de amortiguación (o limpiarse las manos con etanol al 70%) antes de entrar en la habitación estéril. Realizar operaciones en la cámara bacteriana.
6.8. Antes de usar espacio estéril, la lámpara ultravioleta en la habitación estéril debe encenderse para irradiación y esterilización durante más de 30 minutos, y el banco limpio debe encenderse para soplar el aire al mismo tiempo. Después de completar la operación, el espacio estéril debe limpiarse a tiempo y luego esterilizarse por luz ultravioleta durante 20 minutos.
6.9. Antes de la inspección, el empaque externo de la muestra de prueba debe mantenerse intacto y no debe abrirse para evitar la contaminación. Antes de la inspección, use el 70% de las bolas de algodón de alcohol para desinfectar la superficie externa.
6.10. Durante cada operación, se debe hacer un control negativo para verificar la confiabilidad de la operación aséptica.
6.11. Al absorber el líquido bacteriano, debe usar una bola de succión para absorberla. No toque la pajita directamente con la boca.
6.12. La aguja de inoculación debe ser esterilizada por llama antes y después de cada uso. Después de enfriar, el cultivo puede inocularse.
6.13. Las pajitas, los tubos de ensayo, los placas de Petri y otros utensilios que contienen líquido bacteriano deben empaparse en un cubo de esterilización que contenga una solución de lisol al 5% para la desinfección, y se sacan y enjuagan después de 24 horas.
6.14. Si hay líquido bacteriano derramado en la mesa o piso, debe verter inmediatamente una solución de ácido carbólico al 5% o al 3% de lisol en el área contaminada durante al menos 30 minutos antes de tratarla. Cuando la ropa de trabajo y los sombreros están contaminados con líquido bacteriano, deben quitarse inmediatamente y lavarse después de la esterilización de vapor de alta presión.
6.15. Todos los artículos que contienen bacterias vivos deben desinfectarse antes de enjuagarse bajo el grifo. Está estrictamente prohibido contaminar el alcantarillado.
6.16. El número de colonias en la sala estéril debe verificarse mensualmente. Con el banco limpio abierto, tome una serie de placas de Petri estériles con un diámetro interno de 90 mm e inyecte asépticamente aproximadamente 15 ml de medio de cultivo de agar nutrientes que se ha derretido y enfriado a aproximadamente 45 ° C. Después de la solidificación, colóquelo al revés en 30 a 35 incubado durante 48 horas en una incubadora ℃. Después de demostrar esterilidad, tome de 3 a 5 placas y colóquelas en la izquierda, media y derecha de la posición de trabajo. Después de abrir la cubierta y exponerla durante 30 minutos, colóquelos al revés en una incubadora de 30 a 35 ° C durante 48 horas y sácalos. examinar. El número promedio de bacterias misceláneas en el plato en un área limpia de clase 100 no debe exceder 1 colonia, y el número promedio en una sala limpia de clase 10000 no debe exceder 3 colonias. Si se excede el límite, la sala estéril debe desinfectarse a fondo hasta que las inspecciones repetidas cumplan con los requisitos.
7. Consulte el capítulo (Método de inspección de esterilidad) en "Métodos de inspección higiénica de los medicamentos" y "Prácticas operativas estándar de China para la inspección de drogas".
8. Departamento de distribución: Departamento de Gestión de Calidad
Orientación técnica de la sala limpia:
Después de obtener un ambiente estéril y materiales estériles, debemos mantener un estado estéril para estudiar un microorganismo conocido específico o utilizar sus funciones. De lo contrario, varios microorganismos del exterior pueden mezclarse fácilmente. El fenómeno de la mezcla de microorganismos irrelevantes del exterior se llama bacterias contaminantes en microbiología. Prevenir la contaminación es una técnica crítica en el trabajo microbiológico. La esterilización completa por un lado y la prevención de la contaminación, por el otro, son dos aspectos de la técnica aséptica. Además, debemos prevenir los microorganismos en estudio, especialmente los microorganismos patógenos o los microorganismos genéticamente modificados que no existen en la naturaleza, por escapar de nuestros contenedores experimentales al entorno externo. Para estos fines, en microbiología, hay muchas medidas.
La habitación estéril suele ser una habitación pequeña especialmente instalada en el laboratorio de microbiología. Se puede construir con sábanas y vidrio. El área no debe ser demasiado grande, aproximadamente 4-5 metros cuadrados, y la altura debe ser de aproximadamente 2.5 metros. Se debe establecer una sala de amortiguación fuera de la habitación estéril. La puerta de la sala de amortiguación y la puerta de la habitación estéril no deben enfrentar la misma dirección para evitar que el flujo de aire traiga bacterias diversas. Tanto la habitación estéril como la sala de amortiguación deben ser herméticamente. El equipo de ventilación interior debe tener dispositivos de filtración de aire. El piso y las paredes de la habitación estéril deben ser suaves, difíciles de albergar la tierra y fácil de limpiar. La superficie de trabajo debe estar nivelada. Tanto la habitación estéril como la sala de amortiguación están equipadas con luces ultravioleta. Las luces ultravioleta en la habitación estéril están a 1 metro de la superficie de trabajo. El personal que ingresa al cuarto estéril debe usar ropa y sombreros esterilizados.
Actualmente, las habitaciones estériles existen principalmente en fábricas de microbiología, mientras que los laboratorios generales usan un banco limpio. La función principal del banco limpio es usar un dispositivo de flujo de aire laminar para eliminar varios polvos pequeños, incluidos los microorganismos en la superficie de trabajo. El dispositivo eléctrico permite que el aire pase a través del filtro HEPA y luego ingrese a la superficie de trabajo, de modo que la superficie de trabajo siempre se mantiene bajo el control del aire estéril que fluye. Además, hay una cortina de aire de alta velocidad en el costado cerca del exterior para evitar que ingrese el aire bacteriano externo.
En lugares con condiciones difíciles, las cajas estériles de madera también se pueden usar en lugar de un banco limpio. La caja estéril tiene una estructura simple y es fácil de mover. Hay dos agujeros en la parte delantera de la caja, que están bloqueados por puertas de empuje cuando no están en funcionamiento. Puede extender los brazos durante la operación. La parte superior del frente está equipada con vidrio para facilitar la operación interna. Hay una lámpara ultravioleta interior, y los utensilios y bacterias se pueden colocar a través de una pequeña puerta a un lado.
Las técnicas de operación aséptica actualmente no solo juegan un papel fundamental en la investigación y las aplicaciones microbiológicas, sino que también se usan ampliamente en muchas biotecnologías. Por ejemplo, tecnología transgénica, tecnología de anticuerpos monoclonales, etc.
Tiempo de publicación: mar-06-2024