1. Propósito: Este procedimiento tiene como objetivo proporcionar un procedimiento estandarizado para las operaciones asépticas y la protección de las salas estériles.
2. Ámbito de aplicación: laboratorio de pruebas biológicas
3. Persona responsable: Supervisor de control de calidad Tester
4. Definición: Ninguna
5. Precauciones de seguridad
Realice operaciones estrictamente asépticas para evitar la contaminación microbiana; los operadores deben apagar la lámpara UV antes de ingresar a la sala estéril.
6.Procedimientos
6.1. La sala estéril debe estar equipada con un quirófano estéril y una sala tampón. La limpieza del quirófano estéril debe ser de clase 10000. La temperatura interior debe mantenerse entre 20 y 24 °C y la humedad entre el 45 y el 60 %. La limpieza de la mesa de operaciones debe ser de clase 100.
6.2. La sala estéril debe mantenerse limpia y está estrictamente prohibido acumular escombros para evitar la contaminación.
6.3. Evite estrictamente la contaminación de todos los equipos de esterilización y medios de cultivo. Si están contaminados, debe dejar de usarlos.
6.4. La sala estéril debe estar equipada con desinfectantes de concentración efectiva, como solución de cresol al 5%, alcohol al 70%, solución de clormetionina al 0,1%, etc.
6.5. La sala estéril debe esterilizarse periódicamente y limpiarse con el desinfectante adecuado para garantizar que su limpieza cumpla con los requisitos.
6.6. Todos los instrumentos, instrumentos, platos y demás artículos que deban llevarse a la sala estéril deben estar bien envueltos y esterilizados mediante métodos adecuados.
6.7. Antes de entrar a la sala estéril, el personal debe lavarse las manos con jabón o desinfectante y, a continuación, cambiarse a ropa de trabajo, zapatos, gorros, mascarillas y guantes especiales en la sala de tampón (o limpiarse las manos de nuevo con etanol al 70 %) antes de entrar. Realizar las operaciones en la cámara bacteriana.
6.8. Antes de usar la sala estéril, la lámpara ultravioleta debe encenderse para la irradiación y esterilización durante más de 30 minutos, y la mesa de trabajo debe encenderse simultáneamente para el soplado de aire. Una vez finalizada la operación, la sala estéril debe limpiarse a tiempo y luego esterilizarse con luz ultravioleta durante 20 minutos.
6.9. Antes de la inspección, el embalaje exterior de la muestra de prueba debe mantenerse intacto y no debe abrirse para evitar la contaminación. Antes de la inspección, utilice bolitas de algodón con alcohol al 70 % para desinfectar la superficie exterior.
6.10. Durante cada operación, se debe realizar un control negativo para comprobar la fiabilidad de la asepsia.
6.11. Al absorber el líquido bacteriano, utilice una bola de succión. No toque la pajita directamente con la boca.
6.12. La aguja de inoculación debe esterilizarse con llama antes y después de cada uso. Tras enfriarse, el cultivo puede inocularse.
6.13. Las pajillas, tubos de ensayo, placas de Petri y demás utensilios que contengan líquido bacteriano deben sumergirse en un cubo de esterilización con solución de Lysol al 5 % para su desinfección y retirarse y enjuagarse después de 24 horas.
6.14. Si se derrama líquido bacteriano sobre una mesa o el suelo, vierta inmediatamente una solución de ácido carbólico al 5 % o Lysol al 3 % sobre la zona contaminada durante al menos 30 minutos antes de tratarla. Si la ropa de trabajo y los sombreros se contaminan con líquido bacteriano, quíteselos inmediatamente y lávelos después de la esterilización con vapor a alta presión.
6.15. Todos los artículos que contengan bacterias vivas deben desinfectarse antes de enjuagarse bajo el grifo. Está estrictamente prohibido contaminar el alcantarillado.
6.16. El número de colonias en la sala estéril debe revisarse mensualmente. Con la mesa limpia abierta, tome varias placas de Petri estériles con un diámetro interno de 90 mm e inyecte asépticamente alrededor de 15 ml de medio de cultivo de agar nutritivo que se haya fundido y enfriado a aproximadamente 45 °C. Después de la solidificación, colóquela boca abajo a 30 a 35 Incube durante 48 horas en una incubadora de ℃. Después de comprobar la esterilidad, tome de 3 a 5 placas y colóquelas a la izquierda, en medio y a la derecha de la posición de trabajo. Después de abrir la tapa y exponerlas durante 30 minutos, colóquelas boca abajo en una incubadora de 30 a 35 °C durante 48 horas y sáquelas. examine. El número promedio de bacterias diversas en la placa en un área limpia de clase 100 no debe exceder 1 colonia, y el número promedio en una sala limpia de clase 10000 no debe exceder 3 colonias. Si se excede el límite, la sala estéril debe desinfectarse completamente hasta que inspecciones repetidas cumplan con los requisitos.
7. Consulte el capítulo (Método de inspección de esterilidad) en "Métodos de inspección higiénica de medicamentos" y "Prácticas operativas estándar de China para la inspección de medicamentos".
8. Departamento de Distribución: Departamento de Gestión de Calidad
Guía técnica de salas limpias:
Tras obtener un entorno y materiales estériles, es fundamental mantener la esterilidad para estudiar un microorganismo conocido o aprovechar sus funciones. De lo contrario, diversos microorganismos externos pueden mezclarse fácilmente. En microbiología, este fenómeno se denomina "bacterias contaminantes". Prevenir la contaminación es una técnica crucial en el trabajo microbiológico. La esterilización completa, por un lado, y la prevención de la contaminación, por otro, son dos aspectos de la técnica aséptica. Además, debemos evitar que los microorganismos en estudio, especialmente los patógenos o los modificados genéticamente que no existen en la naturaleza, escapen de nuestros recipientes experimentales al exterior. Para estos fines, en microbiología existen diversas medidas.
La sala estéril suele ser una habitación pequeña especialmente diseñada para el laboratorio de microbiología. Puede construirse con láminas y vidrio. El área no debe ser demasiado grande, alrededor de 4-5 metros cuadrados, y la altura debe ser de aproximadamente 2,5 metros. Se debe instalar una sala de amortiguación fuera de la sala estéril. La puerta de la sala de amortiguación y la puerta de la sala estéril no deben estar orientadas en la misma dirección para evitar que el flujo de aire traiga bacterias diversas. Tanto la sala estéril como la sala de amortiguación deben ser herméticas. El equipo de ventilación interior debe tener dispositivos de filtración de aire. El suelo y las paredes de la sala estéril deben ser lisos, difíciles de acumular suciedad y fáciles de limpiar. La superficie de trabajo debe estar nivelada. Tanto la sala estéril como la sala de amortiguación están equipadas con luces ultravioleta. Las luces ultravioleta en la sala estéril están a 1 metro de la superficie de trabajo. El personal que ingresa a la sala estéril debe usar ropa y gorros esterilizados.
Actualmente, las salas estériles se encuentran principalmente en las fábricas de microbiología, mientras que los laboratorios generales utilizan una mesa de trabajo limpia. La función principal de esta mesa es utilizar un dispositivo de flujo de aire laminar para eliminar diversas partículas de polvo, incluyendo microorganismos, de la superficie de trabajo. El dispositivo eléctrico permite que el aire pase a través de un filtro HEPA y luego entre en la superficie de trabajo, de modo que esta se mantenga siempre bajo el control del flujo de aire estéril. Además, cuenta con una cortina de aire de alta velocidad en el lateral, cerca del exterior, para evitar la entrada de aire bacteriano externo.
En lugares con condiciones difíciles, también se pueden utilizar cajas estériles de madera en lugar de una mesa de trabajo limpia. La caja estéril tiene una estructura sencilla y es fácil de mover. Cuenta con dos orificios en la parte frontal, que se bloquean con puertas de empuje cuando no está en funcionamiento. Se pueden extender los brazos durante el uso. La parte superior frontal está equipada con un cristal para facilitar el manejo interno. Dentro de la caja hay una lámpara ultravioleta, y los utensilios y las bacterias se pueden introducir a través de una pequeña puerta lateral.
Las técnicas de cirugía aséptica no solo desempeñan un papel fundamental en la investigación y las aplicaciones microbiológicas, sino que también se utilizan ampliamente en diversas biotecnologías, como la tecnología transgénica, la tecnología de anticuerpos monoclonales, etc.
Hora de publicación: 06-mar-2024