1. Objetivo: Este procedimiento tiene como objetivo proporcionar un procedimiento estandarizado para operaciones asépticas y la protección de salas estériles.
2. Ámbito de aplicación: laboratorio de análisis biológicos
3. Persona responsable: Supervisor de control de calidad (QC Tester)
4. Definición: Ninguna
5. Precauciones de seguridad
Realice operaciones estrictamente asépticas para prevenir la contaminación microbiana; los operarios deben apagar la lámpara UV antes de entrar en la sala estéril.
6. Procedimientos
6.1. La sala estéril debe estar equipada con un quirófano estéril y una sala de almacenamiento intermedio. La limpieza del quirófano estéril debe alcanzar la clase 10000. La temperatura interior debe mantenerse entre 20 y 24 °C y la humedad entre el 45 y el 60 %. La limpieza de la cabina de flujo laminar debe alcanzar la clase 100.
6.2. La sala estéril debe mantenerse limpia y está estrictamente prohibido acumular desechos para evitar la contaminación.
6.3. Evitar estrictamente la contaminación de todos los equipos de esterilización y medios de cultivo. Aquellos que estén contaminados deberán dejar de utilizarse.
6.4. La sala estéril debe estar equipada con desinfectantes de concentración de trabajo, como solución de cresol al 5%, alcohol al 70%, solución de clormetionina al 0,1%, etc.
6.5. La sala estéril debe esterilizarse y limpiarse regularmente con el desinfectante adecuado para garantizar que la limpieza de la sala estéril cumpla con los requisitos.
6.6. Todos los instrumentos, utensilios, vajilla y demás artículos que deban introducirse en la sala estéril deben estar bien envueltos y esterilizados mediante métodos apropiados.
6.7. Antes de entrar en la sala estéril, el personal debe lavarse las manos con jabón o desinfectante y luego cambiarse a ropa de trabajo especial, calzado, gorros, mascarillas y guantes en la sala intermedia (o limpiarse las manos nuevamente con etanol al 70%) antes de entrar en la sala estéril. Realizar operaciones en la cámara bacteriana.
6.8. Antes de utilizar la sala estéril, la lámpara ultravioleta debe encenderse para irradiación y esterilización durante más de 30 minutos, y la cabina de flujo laminar debe encenderse simultáneamente para la ventilación. Una vez finalizada la intervención, la sala estéril debe limpiarse inmediatamente y esterilizarse con luz ultravioleta durante 20 minutos.
6.9. Antes de la inspección, el embalaje exterior de la muestra debe mantenerse intacto y no debe abrirse para evitar la contaminación. Antes de la inspección, utilice bolitas de algodón con alcohol al 70% para desinfectar la superficie exterior.
6.10. Durante cada operación, se debe realizar un control negativo para comprobar la fiabilidad de la operación aséptica.
6.11. Al absorber líquido bacteriano, debe utilizar una bola de succión para absorberlo. No toque la pajita directamente con la boca.
6.12. La aguja de inoculación debe esterilizarse con llama antes y después de cada uso. Tras enfriarse, se puede inocular el cultivo.
6.13. Las pajitas, tubos de ensayo, placas de Petri y demás utensilios que contengan líquido bacteriano deben sumergirse en un cubo de esterilización que contenga una solución de Lysol al 5% para su desinfección, y sacarse y enjuagarse después de 24 horas.
6.14. Si se derrama líquido bacteriano sobre una mesa o el suelo, vierta inmediatamente una solución de ácido carbólico al 5% o Lysol al 3% sobre la zona contaminada durante al menos 30 minutos antes de tratarla. Si la ropa de trabajo y los gorros se contaminan con líquido bacteriano, retírelos inmediatamente y lávelos después de esterilizarlos con vapor a alta presión.
6.15. Todos los objetos que contengan bacterias vivas deben desinfectarse antes de enjuagarlos bajo el grifo. Está estrictamente prohibido contaminar el alcantarillado.
6.16. El número de colonias en la sala estéril debe revisarse mensualmente. Con la cabina de flujo laminar abierta, tome varias placas de Petri estériles con un diámetro interno de 90 mm e inyecte asépticamente unos 15 ml de medio de cultivo de agar nutritivo que se haya fundido y enfriado a unos 45 °C. Después de la solidificación, colóquelas boca abajo en una incubadora a 30-35 °C durante 48 horas. Después de comprobar la esterilidad, tome de 3 a 5 placas y colóquelas a la izquierda, en el centro y a la derecha de la posición de trabajo. Después de abrir la tapa y exponerlas durante 30 minutos, colóquelas boca abajo en una incubadora a 30-35 °C durante 48 horas y retírelas. Examine el número promedio de bacterias diversas en la placa en un área limpia de clase 100 no debe exceder 1 colonia, y el número promedio en una sala limpia de clase 10000 no debe exceder 3 colonias. Si se supera el límite, la sala estéril deberá desinfectarse a fondo hasta que las inspecciones repetidas cumplan con los requisitos.
7. Consulte el capítulo (Método de inspección de esterilidad) en "Métodos de inspección higiénica de medicamentos" y "Prácticas operativas estándar de China para la inspección de medicamentos".
8. Departamento de Distribución: Departamento de Gestión de Calidad
Guía técnica para salas blancas:
Tras obtener un entorno y materiales estériles, debemos mantener la esterilidad para estudiar un microorganismo específico o aprovechar sus funciones. De lo contrario, diversos microorganismos externos pueden introducirse fácilmente. Este fenómeno se denomina contaminación bacteriana en microbiología. Prevenir la contaminación es una técnica fundamental en el trabajo microbiológico. La esterilización completa, por un lado, y la prevención de la contaminación, por otro, son dos aspectos de la técnica aséptica. Además, debemos evitar que los microorganismos en estudio, especialmente los patógenos o los modificados genéticamente que no existen en la naturaleza, escapen de nuestros recipientes experimentales al entorno externo. Para ello, en microbiología existen numerosas medidas.
La sala estéril suele ser una habitación pequeña especialmente acondicionada en un laboratorio de microbiología. Puede estar construida con láminas y vidrio. Su superficie no debe ser demasiado grande, de unos 4-5 metros cuadrados, y su altura debe ser de unos 2,5 metros. Se debe habilitar una sala intermedia fuera de la sala estéril. La puerta de la sala intermedia y la de la sala estéril no deben estar orientadas en la misma dirección para evitar la entrada de bacterias. Tanto la sala estéril como la sala intermedia deben ser herméticas. El sistema de ventilación interior debe contar con dispositivos de filtración de aire. El suelo y las paredes de la sala estéril deben ser lisos, difíciles de ensuciar y fáciles de limpiar. La superficie de trabajo debe estar nivelada. Tanto la sala estéril como la sala intermedia están equipadas con lámparas ultravioleta. Las lámparas ultravioleta en la sala estéril se encuentran a 1 metro de la superficie de trabajo. El personal que ingrese a la sala estéril debe usar ropa y gorros esterilizados.
Actualmente, las salas estériles se encuentran principalmente en laboratorios de microbiología, mientras que los laboratorios generales utilizan cabinas de flujo laminar. La función principal de estas cabinas es eliminar las partículas de polvo, incluidos los microorganismos, de la superficie de trabajo mediante un sistema de flujo de aire laminar. Este sistema eléctrico permite que el aire pase a través de un filtro HEPA antes de entrar en la superficie de trabajo, manteniéndola siempre bajo el control del flujo de aire estéril. Además, cuenta con una cortina de aire de alta velocidad en el lateral que da al exterior para impedir la entrada de aire contaminado por bacterias.
En entornos con condiciones difíciles, las cajas estériles de madera también pueden utilizarse en lugar de mesas blancas. La caja estéril tiene una estructura sencilla y es fácil de transportar. Cuenta con dos orificios en la parte frontal, que se bloquean con puertas de empuje y tracción cuando no está en uso. Permite introducir los brazos durante el procedimiento. La parte superior frontal está equipada con vidrio para facilitar el trabajo interno. En el interior de la caja hay una lámpara ultravioleta, y los utensilios y bacterias se pueden introducir a través de una pequeña puerta lateral.
Actualmente, las técnicas de operación aséptica no solo desempeñan un papel fundamental en la investigación y las aplicaciones microbiológicas, sino que también se utilizan ampliamente en numerosas biotecnologías. Por ejemplo, en la tecnología transgénica, la tecnología de anticuerpos monoclonales, etc.
Fecha de publicación: 6 de marzo de 2024