1. Finalidad: Este procedimiento tiene como objetivo proporcionar un procedimiento estandarizado para operaciones asépticas y protección de salas estériles.
2. Ámbito de aplicación: laboratorio de pruebas biológicas.
3. Persona responsable: Supervisor de control de calidad y probador
4.Definición: Ninguna
5. Precauciones de seguridad
Realizar estrictamente operaciones asépticas para evitar la contaminación microbiana;Los operadores deben apagar la lámpara UV antes de ingresar a la sala estéril.
6.Procedimientos
6.1.La sala estéril debe estar equipada con una sala de operaciones estéril y una sala de amortiguación.La limpieza de la sala de operaciones estéril debe alcanzar la clase 10000. La temperatura interior debe mantenerse entre 20 y 24 °C y la humedad entre 45 y 60 %.La limpieza del banco limpio debe alcanzar la clase 100.
6.2.La habitación estéril debe mantenerse limpia y está estrictamente prohibido acumular escombros para evitar la contaminación.
6.3.Evite estrictamente la contaminación de todos los equipos de esterilización y medios de cultivo.Aquellos que estén contaminados deberían dejar de usarlos.
6.4.La sala estéril debe estar equipada con desinfectantes de concentración funcional, como solución de cresol al 5%, alcohol al 70%, solución de clormetionina al 0,1%, etc.
6.5.La sala estéril debe esterilizarse y limpiarse periódicamente con un desinfectante adecuado para garantizar que la limpieza de la sala estéril cumpla con los requisitos.
6.6.Todos los instrumentos, instrumentos, platos y otros elementos que deban llevarse a una habitación esterilizada deben envolverse herméticamente y esterilizarse mediante los métodos adecuados.
6.7.Antes de ingresar a la sala esterilizada, el personal debe lavarse las manos con jabón o desinfectante y luego ponerse ropa de trabajo especial, zapatos, gorros, máscaras y guantes en la sala intermedia (o limpiarse las manos nuevamente con etanol al 70%) antes de ingresar a la sala esterilizada.Realizar operaciones en cámara bacteriana.
6.8.Antes de usar la sala estéril, la lámpara ultravioleta en la sala estéril debe encenderse para irradiación y esterilización durante más de 30 minutos, y la mesa limpia debe encenderse para soplar aire al mismo tiempo.Una vez completada la operación, la habitación estéril debe limpiarse a tiempo y luego esterilizarse con luz ultravioleta durante 20 minutos.
6.9.Antes de la inspección, el embalaje exterior de la muestra de prueba debe mantenerse intacto y no debe abrirse para evitar la contaminación.Antes de la inspección, utilice bolas de algodón con alcohol al 70 % para desinfectar la superficie exterior.
6.10.Durante cada operación, se debe realizar un control negativo para comprobar la fiabilidad del funcionamiento aséptico.
6.11.Al absorber líquido bacteriano, debes utilizar una bola de succión para absorberlo.No toques la pajita directamente con la boca.
6.12.La aguja de inoculación debe esterilizarse mediante llama antes y después de cada uso.Después de enfriar, se puede inocular el cultivo.
6.13.Las pajitas, tubos de ensayo, placas de Petri y otros utensilios que contengan líquido bacteriano deben remojarse en un balde de esterilización que contenga una solución de Lysol al 5% para desinfección, y sacarse y enjuagarse después de 24 horas.
6.14.Si se derrama líquido bacteriano sobre la mesa o el piso, debe verter inmediatamente una solución de ácido fénico al 5% o Lysol al 3% en el área contaminada durante al menos 30 minutos antes de tratarla.Cuando la ropa de trabajo y los sombreros están contaminados con líquido bacteriano, se deben quitar inmediatamente y lavar después de la esterilización con vapor a alta presión.
6.15.Todos los artículos que contengan bacterias vivas deben desinfectarse antes de enjuagarse bajo el grifo.Está estrictamente prohibido contaminar el alcantarillado.
6.16.Se debe comprobar mensualmente el número de colonias en la sala estéril.Con la mesa limpia abierta, tome varias placas de Petri estériles con un diámetro interior de 90 mm e inyecte asépticamente unos 15 ml de medio de cultivo agar nutritivo que se haya derretido y enfriado a unos 45 °C.Después de la solidificación, colóquelo boca abajo a 30 a 35 Incubar durante 48 horas en una incubadora ℃.Después de comprobar la esterilidad, tome de 3 a 5 placas y colóquelas a la izquierda, al centro y a la derecha de la posición de trabajo.Después de abrir la tapa y exponerlos durante 30 minutos, colóquelos boca abajo en una incubadora de 30 a 35°C durante 48 horas y sáquelos.examinar.El número promedio de bacterias diversas en la placa en un área limpia de clase 100 no deberá exceder de 1 colonia, y el número promedio en una sala limpia de clase 10000 no deberá exceder de 3 colonias.Si se excede el límite, la sala estéril debe desinfectarse completamente hasta que las inspecciones repetidas cumplan con los requisitos.
7. Consulte el capítulo (Método de inspección de esterilidad) en "Métodos de inspección higiénica de medicamentos" y "Prácticas operativas estándar de China para la inspección de medicamentos".
8. Departamento de Distribución: Departamento de Gestión de Calidad
Orientación técnica de sala limpia:
Después de obtener un ambiente estéril y materiales estériles, debemos mantener un estado estéril para poder estudiar un microorganismo conocido específico o utilizar sus funciones.De lo contrario, pueden mezclarse fácilmente diversos microorganismos del exterior. El fenómeno de la mezcla de microorganismos irrelevantes del exterior se denomina en microbiología bacterias contaminantes.Prevenir la contaminación es una técnica crítica en el trabajo microbiológico.La esterilización completa, por un lado, y la prevención de la contaminación, por otro, son dos aspectos de la técnica aséptica.Además, debemos evitar que los microorganismos en estudio, especialmente los microorganismos patógenos o los microorganismos genéticamente modificados que no existen en la naturaleza, escapen de nuestros contenedores experimentales al ambiente externo.Para estos fines, en microbiología existen muchas medidas.
La sala estéril suele ser una pequeña sala especialmente habilitada en el laboratorio de microbiología.Se puede construir con láminas y vidrio.El área no debe ser demasiado grande, unos 4-5 metros cuadrados, y la altura debe ser de unos 2,5 metros.Se debe instalar una sala de amortiguamiento fuera de la sala estéril.La puerta de la sala de amortiguación y la puerta de la sala estéril no deben mirar en la misma dirección para evitar que el flujo de aire introduzca bacterias diversas.Tanto la sala estéril como la sala intermedia deben ser herméticas.Los equipos de ventilación interior deben contar con dispositivos de filtración de aire.El suelo y las paredes de la sala estéril deben ser lisos, difíciles de albergar suciedad y fáciles de limpiar.La superficie de trabajo debe estar nivelada.Tanto la sala estéril como la sala de amortiguación están equipadas con luces ultravioleta.Las luces ultravioleta en una sala estéril están a 1 metro de la superficie de trabajo.El personal que ingresa a la sala esterilizada debe usar ropa y gorros esterilizados.
Actualmente, las salas estériles existen principalmente en las fábricas de microbiología, mientras que los laboratorios generales utilizan mesas limpias.La función principal del banco de limpieza es utilizar un dispositivo de flujo de aire laminar para eliminar varios polvos diminutos, incluidos los microorganismos, en la superficie de trabajo.El dispositivo eléctrico permite que el aire pase a través del filtro hepa y luego entre a la superficie de trabajo, de modo que la superficie de trabajo siempre se mantenga bajo el control del flujo de aire estéril.Además, hay una cortina de aire de alta velocidad en el lado cercano al exterior para evitar la entrada de aire bacteriano externo.
En lugares con condiciones difíciles, también se pueden utilizar cajas esterilizadas de madera en lugar de un banco limpio.La caja esterilizada tiene una estructura sencilla y es fácil de mover.Hay dos orificios en la parte frontal de la caja, que están bloqueados por puertas de vaivén cuando no están en funcionamiento.Puede extender los brazos durante la operación.La parte superior del frontal está equipada con cristal para facilitar el funcionamiento interno.Hay una lámpara ultravioleta dentro de la caja y se pueden colocar utensilios y bacterias a través de una pequeña puerta lateral.
Actualmente, las técnicas operativas asépticas no sólo desempeñan un papel fundamental en la investigación y las aplicaciones microbiológicas, sino que también se utilizan ampliamente en muchas biotecnologías.Por ejemplo, tecnología transgénica, tecnología de anticuerpos monoclonales, etc.
Hora de publicación: 06-mar-2024